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人参与林蛙油配伍的保健食品体外致突变试验研究

 论文栏目:保健论文     更新时间:2016-11-08 14:56:51

  人参作为闻名的中草药 , 在中国已经运用了几千年之久 , 据《神农本草经》记载 :人参主补五脏 , 安精神 , 定灵魂 , 止惊悸 , 除邪气 , 明目高兴益智 , 久服轻身延年。 林蛙油又称蛤蟆油、田鸡油、哈什蚂油 , 为雌性林蛙枯燥的输卵管制品 , 具有补肾益精、润肺养阴之功效 , 其主要散布东北长白山区。林蛙油中含有多种生理活性物质 , 具有显着的生理保健效果。因此 , 这篇文章选用 Ames 实验平皿掺入法对人参加林蛙油配伍的保健食品进行了体外致骤变效应开始讨论 , 为其保健食品开发利用提出科学理论根据。

  1材料与办法

  1. 1材料

  1. 1. 1试剂 人参加林蛙油配伍的保健食品 , 由本实验室克己 ;敌克松、叠氮钠、二氨基芴、1, 8- 二羟基蒽醌均购自 Sigma 公司 ;D- 生物素、L- 盐酸组氨酸购自 Fluka 公司 ;鼠伤寒沙门氏菌骤变型菌株 TA97、TA98、TA100、TA102和 S9 均购自上海启发实验有限公司。

  1. 1. 2仪器 电热恒温培育箱、电热恒温水浴箱 , 均由上海基玮实验仪器设备有限公司产 ;立式压力蒸汽灭菌仪(YXQ-LS-50G 型 ), 上海博迅实业有限公司医疗设备厂产 ;METTLER TOLEDO-AB204-N 分析天平 , 上海产。

  1. 2办法

  1. 2. 1实验办法 根据《保健食品安全性毒理学评估程序和查验办法规范》中介绍的平板掺入法进行实验。实验设5000、1000、200、40、8 g/ 皿 5 个剂量。取 2.5 g 受试物加二甲基亚砜至 50 ml 混均即为 5000 g/ 皿剂量 , 其他各受试物剂量 1/5 倍比递减稀释 ;上述受试液经灭菌 ( 时刻 :20 min,温度 :121℃ , 压力 :0.103 MPa) 后运用 ;另设未处理对照、溶剂对照、阳性对照。在顶层琼脂中参加 0.1 ml 实验菌株增菌液、0.1 ml 受试物溶液 , 代谢活化时参加 0.5 ml S9 混合液 ,混匀后倒入底层培育基平板上。37℃ , 培育 48 h, 计数每皿回变菌落数。假如受试物的回变菌落数是自发回变菌落数 2倍以上 , 并具有剂量 - 反响联系者则定为阳性。每个剂量做3 个平行。整套实验在一样条件下重复做 2 次并别离计算。

  1. 2. 2 阳性对照 活化体系 TA97、TA98、TA100 选用二氨基芴 10.0 g/ 皿 , TA102 为 1, 8- 二羟基蒽醌 50.0 g/ 皿。非活化体系 TA97、TA98、TA102 为敌克松 50.0 g/ 皿 , TA100为叠氮钠 1.5 g/ 皿。

  1. 3 计算学办法 选用 SPSS17.0 计算学软件对数据进行计算分析。计量材料以均数 规范差 ( x-s) 表明 , 选用 t 查验。P0.05 表明区别具有计算学含义。

  2成果

  成果显现 , 将人参加林蛙油配伍的保健食品在鼠伤寒沙门氏菌组氨酸养分缺点型骤变株 TA97、TA98、TA100、TA102 进行平板掺入实验 , 无论在加和不加 S9 混合液时 ,8~5000 g/ 皿各剂量组均未导致实验菌株的回复骤变菌落数明显添加 , 与阴性对照组对比区别无计算学含义 (P溶剂对照组的菌落回变数与阴性对照组对比区别无计算学含义 (P阳性诱变剂诱发回变菌落数均显着添加 , 与阴性对照对比区别有计算学含义 (P0.01)。

  3讨论

  Ames 实验是国际上通用的遗传毒理学鉴定致骤变的必检项目之一。选用鼠伤寒沙门氏菌的组氨酸养分缺点型菌株作为微生物 , 检查化学物的致骤变性。人工诱变的鼠伤寒沙门氏菌的组氨酸养分缺点型菌株在其组氨酸操纵子中有一个骤变 , 骤变菌株必需以来外源性组氨酸才干成长 , 在无组氨酸的选择性培育基上不能存活 , 诱变剂可使其基因发作回复骤变 , 使它在缺少组氨酸的培育基上也能成长。别的 ,Ames 实验在安全性评估方面具有无足轻重的效果 , 应在生物安全柜中操作及调查成果 , 留意严厉无菌操作 , 以确保本次实验成果的可靠性。

  本实验将人参加林蛙油配伍的保健食品与各规范菌液混合后在最低养分板上培育 , 根据呈现的回变菌落数及致骤变比值来判别其是不是存在诱变物质。成果显现 , 在有无 S9 的效果下 , 人参加林蛙油配伍的保健食品各剂量组均未发现测验菌株回变菌落数超越阴性对照组回变菌落数的 2 倍 , 且无剂量 - 反响联系 , 而阳性对照组各测验菌株的回变菌落数均显着添加 , 并超越阴性对照组回变菌落数的 2 倍以上 , 证明本实验条件下 , 鼠伤寒沙门氏菌的组氨酸养分缺点型骤变菌株对人参加林蛙油配伍的保健食品检查成果为阴性 , 实验成果表明 , 人参加林蛙油配伍的保健食品在 5000-8g/ 皿的剂量内无致骤变性 , 为其进行功用学评估供给了科学根据。

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